小鼠白介素-6 ELISA檢測試劑盒

 規格96T 
 前言簡介
 白介素6是一種細胞因子,已被證實為B細胞分化因子.它是一種抗體形成系統,它的生理特性,如肝細胞急性蛋白合成的誘導和基于和白介素3協同作用的生長激等,也備受關注. 并且已證實白介素-6與病理學存在穩定的相關關系.例如,報道多種疾病的生長因子為白介素-6, 骨髓瘤細胞能合成白介素-6并表達白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性疾病和自身免疫疾病發揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測小鼠血清和細胞基質上清的白介素6 原理 此試劑盒運用了兩種特異性抗體,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強度與小鼠的白介素-6的量成正比.  檢測范圍 10.94  700 pg/mL  
預期用途
 ■此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測
  試劑盒成分
1  預包被板:     抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化                96T
2  酶標記抗體:    （30倍濃縮）HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化         0.4mL x 1
 3  標準品:           重組小鼠白介素-6                        0.5mL x 2     
 4  EIA緩沖液:         含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS 30mL x 1
5  標記抗體稀釋液:       含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS 12mL x 1
 6  顯色劑:   TMB底物液 15mL x 1
7  終止液:   1N硫酸 12mL x 1
8  濃縮洗滌液:  （40倍濃縮） 含1% BSA, 0.05%吐溫20  BPS                      50mL x 1   操作說明 1實驗所需器材（但試劑盒沒有提供）   酶標儀（450nm）           微移液管及其吸嘴   量筒及燒杯             去離子水   冰箱（4°C）               坐標紙（log/log）   吸水紙                 試管（用于標準品稀釋）   溫育箱（37°C ± 1°C）   洗瓶 （用于洗板）   一次性試劑管（用于濃縮酶標記抗體和顯色劑）

2準備
1） 洗滌液的準備 試劑盒的洗滌液是一種40倍濃縮液,用1950 mL去離子水稀釋50 mL的濃縮洗滌液,制成2000mL即用稀釋洗滌液. 置于冰箱內可保存2周.
2） 酶標記抗體的準備 試劑盒中的標記抗體是一種30倍濃縮物,根據所需量,用標記抗體稀釋液稀釋30倍. 示例: 如果你用一條板（8孔）,就需800  μL.的標記抗體.就用870  μL的標記抗體稀釋液稀釋30  μL抗體濃縮液,充分混勻.并每孔各加100 μL 濃縮酶標記抗體需稀釋后才能用于實驗 剩余的稀釋標記抗體液需密封瓶裝,存于4°C
3） 標準品的準備 加0.5 mL的去離子水到瓶裝標準品,制成濃度為1,400 pg/mL小鼠白介素-6標準品液
4） 標準品的稀釋 準備8支試管,并每支各加230 μL  EIA緩沖液.稀釋成如下濃度,
步驟如下圖所示: 試管1                            700 pg/mL 試管2                            350 pg/mL 試管3           175 pg/ mL 試管4           87.5 pg/mL 試管5            43.75 pg/mL 試管6            21.88 pg/mL 試管7            10.94pg/mL 試管8                      0 pg/mL（樣品空白對照） 吸取230ul的標準品液于1號管混勻然后從1號管吸取230ul加入2號管混勻如下圖所示,按此規律稀釋系列標準品濃度范圍為10.94-700 pg/mL,第8號管為0 pg/mL作為樣品空白對照 
 5） 樣品稀釋  樣品如需稀釋時,必須用EIA緩沖液進行稀釋  如果樣品中小鼠白介素-6的濃度范圍一無所知的話,預先準備幾個不同稀釋濃度的樣品液來確定*的檢測濃度.   

3實驗步驟 使用前將所有試劑應平衡至室溫大約30min充分混勻確保試劑質量無改變標準曲線和樣品檢測必須同時進行.   試劑 待檢測樣品 標準品 樣品空白 試劑空白 檢 測 樣 品100ul 稀釋標準品1-7管100ul EIA緩沖液第8管 100ul EIA緩沖液100ul 蓋板于4°C下溫育過夜 洗板7次 酶標抗體 100ul 100ul 100ul - 蓋板于4°C下溫育30min 洗板9次 顯色劑 100ul 100ul 100ul 100ul 室溫避光溫育30min 終止液 100ul 100ul 100ul 100ul 加終止液后,30min內于450nm處讀取OD值
1 設試劑空白對照并于相應的微孔中加入100ul EIA緩沖液
2 確定好樣品空白對照孔檢測樣品孔和標準品孔分別將100ul樣品對照品（8號管）、檢測樣品和稀釋好的標準品（1-7號管）加入到相應的微孔中。
 3 蓋板4°C下溫育過夜
4 用洗滌瓶劇烈洗板,再加入稀釋洗滌液,靜置15-30秒,再*倒去孔內反應液 重復洗板7次. zui后在吸水紙上拍干,去除殘留液滴 如用自動洗板機洗板,先自動洗4次,再按上述用洗瓶手工洗3次
5 除試劑空白對照孔外,其余每孔各加100ul酶標抗體
6 蓋板4°C下溫育30min
7 按照上述步驟4洗板9次
8 用一次性試管取所需量的顯色劑各加100ul顯色劑于微孔中.為了避免污染勿將剩余試劑在倒回試劑瓶中
9 室溫避光溫育30min加入顯色劑后溶液顏色會變成藍色
 10每孔各加100ul終止液溶液顏色會變成黃色
11擦去微孔板底部的污跡或水滴確保微孔內溶液無氣泡產生.加入終止液后30min內于酶標儀 450nm處讀取結果   特別注意
 1） 收集樣品后即盡快檢測. 如需保存, 凍存樣品,但要避免反復凍融.檢測前,將樣品解凍至室溫
 2） 如樣品需稀釋,用EIA緩沖液稀釋
 3） 樣品和標準品建議做雙份檢測
4） 保持樣品處于中性PH范圍.有機溶劑的污染會影響實驗結果
 5） 只能用本試劑盒提供的洗滌液洗板.不充足的洗板會導致錯誤的結果   6） 在吸水紙上拍干去除殘留液滴時,切勿用吸水紙刮擦孔內壁 
 7） 顯示劑應避光保存并避免與金屬物質接觸  
8） 加終止液后,30 min內就應讀取實驗結果   
結果計算 所有實驗數據（包括標準品,檢測樣品的OD值）,都應減去樣品空白對照的OD值. 在log-log坐標紙用,以較正的OD值為縱坐標,相對應的濃度為橫坐標,建立標準曲線. 樣品直接在標準曲線上獲取濃度值.

每次實驗都應建立其標準曲線.  使用及處理常規事項
 1所有試劑置于2 - 8°C保存.實驗前將試劑平衡至室溫（約30分鐘）
2瓶裝標準品是凍干品,故小心打開瓶蓋
3終止液是強酸物質.使用時,避免其接觸皮膚和衣膚
 4棄置用過的物質前,用水沖洗
 5 濃縮酶標抗體,EIA緩沖液和濃縮洗滌液可能會出現沉淀,但這并不會影響實驗
6使用試劑后應洗手
7切勿混用不同批號的試劑
 8別使用過期的試劑
9試劑盒僅供研究用,不能用于臨床診斷  存儲與有效期 存儲條件: 2 - 8°C 有效期見試劑盒外包裝 
本譯文僅供參考詳情請以原文為準。